Россия

lab@ noykem.ru

Москва: (499) 346-39-14,  (495) 77-46-319   Новосибирск: (383) 363-85-90 (многоканальный)

Наша задача - обеспечивать Ваши лаборатории качественной продукцией

 

Автор: 
Спичкина Ольга Георгиевна (научный сотрудник)
Организация: 
ФГБУ Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России, Лаборатория клеточных медицинских технологий Отдела радиационной медицины, гематологии и токсикологии, г. Санкт-Петербург
 
 
Конкурсная работа: 
 

  Во всем мире клеточные технологии широко применяются в регенеративной медицине наряду со стандартными методами лечения. Кроме ГСК и клеток кожи широко используются также и мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК). В силу своих уникальных свойств, в первую очередь способности дифференцироваться в различных направлениях, МСК привлекают внимание большого количества исследователей и врачей. Наряду с костным мозгом в качестве основного источника МСК все чаще рассматривается жировая ткань в связи с ее доступностью.

 

   Целью данной работы было получить и охарактеризовать МСК из жировой ткани здорового донора после длительного культивирования.

 

   Материалы и методы.

   Образцы подкожной жировой клетчатки были получены в ходе плановой косметологической операции (липосакции), обработаны механическим способом. Затем их подвергали действию коллагеназы (Sigma). Диссоциированные клетки центрифугировали в пробирках объемом 50 мл (ТРР) и рассевали на культуральные флаконы (ТРР).

   Культивирование клеток проводили на среде аМЕМ (Sigma) с добавлением 20% телячьей сыворотки (HyClone) и ростового фактора FGFb (HyClone). Морфологию клеток оценивали с помощью инвертированного микроскопа (Olympus). Фенотипирование клеток проводили с использованием антител к CD34, CD90, CD105, CD73, HLA DR, CD271, CD14 и CD45 методом проточной цитометрии.

 

   Результаты.

   В течение всего времени культивирования (около 3,5 недель) на культуральном пластике клетки чувствовали себя прекрасно. МСК проявляли свойства и фенотип, характерный для данного типа клеток. Морфология клеток – фибробластоподобная (рис. 1). За 3 недели клетки прошли 4 пассажа, их количество увеличилось примерно в 50 раз, что говорит о хороших условиях культивирования, и в том числе о качественной подложке.

 

Рис. 1. МСК на следующий день после пересева.

 

   После культивирования, клетки показали соответствие фенотипу МСК, что было оценено с помощью антител к CD34, CD90, CD105, CD73, HLA DR, CD271, CD14 и CD45 методом проточной цитометрии (табл. 1).

Маркер Количество клеток, %
CD45 0,5 %
CD34 12,1%
CD14 2,6%
HLA-DR 8,9%
CD73 100%
CD105 99,6%
CD90 100%

Таблица 1. Результаты фенотипирования клеток.

 

   Как видно из табл. 1 и рис. 2, более 99% клеток окрашивались антителами к CD73, CD90 и CD105, которые являются поверхностными маркерами мезенхимальных стволовых клеток. В то же время лишь небольшое количество клеток характеризовались наличием CD45 и 14 – маркеров гемапоэтических клеток. По данным разных авторов у МСК, выделенных из жировой ткани, процент клеток, несущих маркер CD34, сильно варьирует. В нашем случае таких клеток в популяции было около 12%.

a b
c

Рис. 2. Результаты проточной цитометрии МСК при окрашивании клеток антителами к поверхностным маркерам:


a) CD105/CD90
b) HLA-DR/CD45
c) CD73/CD45

  

Выводы.

   На основании полученных данных можно утверждать, что МСК при длительном культивировании на пластике фирмы ТРР (Швейцария) проявляют свойственный им фенотип и имеют характерную для данного типа клеток морфологию.

Это интересно!

Коровы могут расстроиться, если люди смеются над ними.

НАШИ ПРОЕКТЫ

 

КУЛЬТУРАЛЬНАЯ ПОСУДА

ВИДЕО     ОБЗОР ТОВАРОВ     КАТАЛОГ

 


 

КРИОГЕННОЕ ОБОРУДОВАНИЕ

ВИДЕО     ОБЗОР ТОВАРОВ     КАТАЛОГ

ЗАПОЛНИТЬ КРИО АНКЕТУ

 


 

КОМПЛЕКСНЫЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

 

 

для центров ЭКО:   сайт   прайс

           для ЦГиЭ:   сайт   прайс

 


 

ОПТОВЫЕ ПОСТАВКИ РЕАКТИВОВ

Касторовое масло LUVOTIX R

1,4-Нафтохинон

Корзина

Итоговая сумма:   0.00 Руб.
В корзину
www.noykem.ru
lab@ noykem.ru
(499) 346-39-14, (495) 77-46-319
(383) 363-85-90 (многоканальный)


Copyright (с) 2013 - 2017 ООО "Нойкем"