Россия

lab@ noykem.ru

Москва: (499) 346-39-14,  (495) 77-46-319   Новосибирск: (383) 363-85-90 (многоканальный), 332-80-42, 332-41-37

Наша задача - обеспечивать Ваши лаборатории качественной продукцией

 

Автор: 
Спичкина Ольга Георгиевна (научный сотрудник)
Организация: 
ФГБУ Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России, Лаборатория клеточных медицинских технологий Отдела радиационной медицины, гематологии и токсикологии, г. Санкт-Петербург
 
 
Конкурсная работа: 
 

  Во всем мире клеточные технологии широко применяются в регенеративной медицине наряду со стандартными методами лечения. Кроме ГСК и клеток кожи широко используются также и мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК). В силу своих уникальных свойств, в первую очередь способности дифференцироваться в различных направлениях, МСК привлекают внимание большого количества исследователей и врачей. Наряду с костным мозгом в качестве основного источника МСК все чаще рассматривается жировая ткань в связи с ее доступностью.

 

   Целью данной работы было получить и охарактеризовать МСК из жировой ткани здорового донора после длительного культивирования.

 

   Материалы и методы.

   Образцы подкожной жировой клетчатки были получены в ходе плановой косметологической операции (липосакции), обработаны механическим способом. Затем их подвергали действию коллагеназы (Sigma). Диссоциированные клетки центрифугировали в пробирках объемом 50 мл (ТРР) и рассевали на культуральные флаконы (ТРР).

   Культивирование клеток проводили на среде аМЕМ (Sigma) с добавлением 20% телячьей сыворотки (HyClone) и ростового фактора FGFb (HyClone). Морфологию клеток оценивали с помощью инвертированного микроскопа (Olympus). Фенотипирование клеток проводили с использованием антител к CD34, CD90, CD105, CD73, HLA DR, CD271, CD14 и CD45 методом проточной цитометрии.

 

   Результаты.

   В течение всего времени культивирования (около 3,5 недель) на культуральном пластике клетки чувствовали себя прекрасно. МСК проявляли свойства и фенотип, характерный для данного типа клеток. Морфология клеток – фибробластоподобная (рис. 1). За 3 недели клетки прошли 4 пассажа, их количество увеличилось примерно в 50 раз, что говорит о хороших условиях культивирования, и в том числе о качественной подложке.

 

Рис. 1. МСК на следующий день после пересева.

 

   После культивирования, клетки показали соответствие фенотипу МСК, что было оценено с помощью антител к CD34, CD90, CD105, CD73, HLA DR, CD271, CD14 и CD45 методом проточной цитометрии (табл. 1).

Маркер Количество клеток, %
CD45 0,5 %
CD34 12,1%
CD14 2,6%
HLA-DR 8,9%
CD73 100%
CD105 99,6%
CD90 100%

Таблица 1. Результаты фенотипирования клеток.

 

   Как видно из табл. 1 и рис. 2, более 99% клеток окрашивались антителами к CD73, CD90 и CD105, которые являются поверхностными маркерами мезенхимальных стволовых клеток. В то же время лишь небольшое количество клеток характеризовались наличием CD45 и 14 – маркеров гемапоэтических клеток. По данным разных авторов у МСК, выделенных из жировой ткани, процент клеток, несущих маркер CD34, сильно варьирует. В нашем случае таких клеток в популяции было около 12%.

a b
c

Рис. 2. Результаты проточной цитометрии МСК при окрашивании клеток антителами к поверхностным маркерам:


a) CD105/CD90
b) HLA-DR/CD45
c) CD73/CD45

  

Выводы.

   На основании полученных данных можно утверждать, что МСК при длительном культивировании на пластике фирмы ТРР (Швейцария) проявляют свойственный им фенотип и имеют характерную для данного типа клеток морфологию.

Это интересно!

Стволовые клетки ("stem cell") ― уникальный тип незрелых клеток, которые являются прародительницами всех клеток и тканей нашего организма.

Корзина

Итоговая сумма:   0.00 Руб.
В корзину
www.noykem.ru
lab@ noykem.ru
(499) 346-39-14, (495) 77-46-319
(383) 363-85-90 (многоканальный)
(383) 332-80-42, 332-41-37


Copyright (с) 2013 - 2017 ООО "Нойкем"