Россия

lab@ noykem.ru

Москва: (499) 346-39-14,  (495) 77-46-319   Новосибирск: (383) 363-85-90 (многоканальный), 332-80-42, 332-41-37

Наша задача - обеспечивать Ваши лаборатории качественной продукцией

 

Автор: 
Войтова Ксения Васильевна (научный сотрудник)
Организация: 
Государственное научное учреждение, Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, лаборатория биотехнологии-диагностический центр, п. Краснообск, Новосибирская область
 
Конкурсная работа: 

   В настоящее время в нашей стране развивается молочное животноводство, что сопровождается  высокой концентрацией животных на ограниченных территориях, изменениями  технологии их содержания и кормления. Это приводит к возникновению у них  вторичных иммунодефицитов и различных болезней, в том числе и инфекционных.

   В этиологии массовых бронхопневмоний значительная роль принадлежит вирусам, размножение которых в органах респираторного тракта способствует активизации условно-патогенной микрофлоры, в частности бактерий семейства Pasteurellaceae. Одним из них является вирус респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота. Вирус вызывает болезнь, характеризующуюся сильным кашлем, высокой температурой и поражением нижних отделов дыхательных путей животных. Возбудитель строго специфичен, поражает только органы респираторного тракта и очень чувствителен к воздействию факторов внешней среды, особенно к многократным замораживаниям и оттаиваниям, низким значениям рН. При +4ºС он сохраняет свою активность в течение  недели, при -70ºС - до 2- мес. В связи с низкой чувствительностью, а зачастую и невозможности проведения вирусологических исследований с использованием культур клеток, перспективным является использование молекулярных методов, особенно ПЦР (полимеразная цепная реакция).

 

Целью данной работы было изучение влияния сроков хранения в жидком азоте проб вируссодержащего материала на пригодность их исследования в ПЦР.

   В работе использовали фильтрующие насадки двух фирм (TPP  и еще одного производителя), культуральные матрасы трех фирм (TPP и еще 2-х производителей), культуральные планшеты трех фирм (TPP и еще 2-х производителей), криопробирки фирмы TPP и еще 2-х производителей.

   Пробы органов верхнего и нижнего респираторного тракта, поступившие из хозяйств, где регистрировались массовые респираторные болезни животных, перетирали в фарфоровых ступках с песком, гомогенизировали и готовили 10%-е суспензии на физиологическом растворе, после чего центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 мин. Полученные суспензии предварительно исследовали в ОТ-ПЦР. В случае получения положительных результатов, вируссодержащую суспензию пропускали через фильтрующие насадки, затем вносили в перевиваемую культуру клеток ТЭБ (тестикулы эмбриона крупного рогатого скота). После пяти пассажей вируссодержащую суспензию титровали в 96-луночных плоскодонных планшетах, затем делили на несколько равных частей и помещали на хранение в жидкий азот. Через определенные промежутки времени их размораживали и исследовали в ПЦР.

 

   Изучение условий хранения вируса респираторно-синцитиальной инфекции в жидком азоте весьма актуально и имеет значение для дальнейших вирусологических исследований.

   Исследования показали, что хранившийся вируссодержащий материал  давал положительный результат в ПЦР в течение четырех и более месяцев при условии хранения в жидком азоте, в то время как при хранении в условиях бытового холодильника при температуре +4°С РНК вируса хранится две недели, при температуре -18°С – 2,5 - 3 месяца.

   Вирус респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота очень чувствителен (к заморозке и оттаиванию) температурным колебаниям, может сохранять свою активность в течение 3 мес. и быть пригодным для молекулярно-генетических исследований. Полученные данные необходимо учитывать при проведении диагностических исследований с использованием молекулярных методов.

 

   Для проведения данной работы использовали продукцию пяти фирм (одна из которых ТРР, Швейцария).

   Материал, из которого изготовлены изделия фирмы ТРР высокого качества, о чем свидетельствует факт благоприятного роста на нем культур клеток.

 

Рисунок 1.

   Культуральные флаконы (рис. 1) отличаются некоторым удобством - у них отсутствуют «мёртвые зоны» благодаря геометрии горловины, что позволяет полностью снимать культуру клеток с поверхности флакона серологической пипеткой. Легко и удобно закручивается крышка.

 

Рисунок 2.    

   Культуральные планшеты фирмы ТРР (рис. 2) хорошо маркированы просматриваемой, яркой буквенно-цифровой нумерацией. Имеется желтое поле для надписей, удобные, хорошо просматриваемые лунки.

 

Рисунок 3.

   В работе использовали криопробирки трех фирм объемом 1,2 мл (рис.3). Положительное отличие пробирок фирмы ТРР от двух других заключается в геометрии резьбы, которая располагается на внешней стороне пробирки, тем самым оставляя внутреннюю поверхность гладкой; пробирки плотно закрываются без силиконовых уплотнений; компактный размер пробирок позволяет вместить большее их количество в термоконтейнер. Основание, выполненное в форме звезды, придает пробирке наибольшую устойчивость.  

Это интересно!

В организме взрослого человека содержится около 70 кг. кислорода, углерода, водорода и азота. Кальция и фосфора — около 2 кг. Калия, серы, натрия, хлора — имеется по нескольку десятков гр. Железа в человеке всего около 6 грамм.

Корзина

Итоговая сумма:   0.00 Руб.
В корзину
www.noykem.ru
lab@ noykem.ru
(499) 346-39-14, (495) 77-46-319
(383) 363-85-90 (многоканальный)
(383) 332-80-42, 332-41-37


Copyright (с) 2013 - 2017 ООО "Нойкем"