Россия

lab@ noykem.ru

Москва: (499) 346-39-14,  (495) 77-46-319   Новосибирск: (383) 363-85-90 (многоканальный)

КАТАЛОГ

Наша задача - обеспечивать Ваши лаборатории качественной продукцией

 

Автор: 
Нефедченко Алексей Васильевич (Кандидат ветеринарных наук, доцент, старший научный сотрудник)
Организация: 
ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, лаборатория биотехнологии - диагностический центр, п. Краснообск, Новосибирская область
 
Конкурсная работа: 

   В лаборатории биотехнологии-диагностический  центр ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии проводятся исследования по изучению распространения вирусных болезней животных, разработке методов диагностики и борьбы с ними.  Работа проводится в хозяйствах Новосибирской, Тюменской, Томской, Омской, Кемеровской, Иркутской областей, Красноярского края и Республики Казахстан.

   Вирусная диарея – болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (ВД-БС КРС)- контагиозная болезнь, вызываемая РНК-содержащим вирусом. Согласно современной классификации, возбудитель относиться к роду Pestivirus семейства Flaviviridae и существует в виде двух биотипов: цитопатогенного и нецитопатогенного. Последний не вызывает деструкцию культур клеток. В природе преобладает нецитопатогенный вариант, и фактически, он имеет наибольшее эпизоотологическое значение.

   В нашей лаборатории используются методики, позволяющие выделять и культивировать как цито-, так и нецитопатогенные варианты вируса ВД-БС КРС.

 

   Для культивирования обоих вариантов вируса ВД-БС используется перививаемая культура клеток коронарных сосудов теленка (КСТ), обладающей высокой чувствительностью к вирусу.

   Культуру выращиваем в культуральных планшетах в питательной среде Игла МЕМ с однократным и двойным набором аминокислот и витаминов, 0,06% L-глутамина, 100 мкг/мл канамицина, с добавлением сыворотки крови лошади для предупреждения возможной контаминации культуры клеток. Клетки культивируем при 370С. В качестве поддерживающей среды используем ту же среду, но без сыворотки. Для выделения вируса также используем первично-трипсинизированную культуру клеток тестикул бычка.

   Для выделения и культивирования вируссодержащую суспензию  вносим в монослой культуры клеток, одсорбцию проводим при 37°С в течение 60 мин, а затем добавляем поддерживающую питательную среду. Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируем при 37°С и 5% СО2 до 7 суток, ежедневно просматривая их с целью выявления ЦПД. Идентификацию нецитопатогенных штаммов и изолятов проводим после пяти слепых пассажей в культуре клеток, путем исследования культуральной жидкости в ОТ-ПЦР.

   Инфекционный титр цитопатогенных штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС определяем путем титрования микрометодом в культуре клеток КСТ, по наличию цитопатического действия вируса. Инфекционным титром вируса считаем его наивысшее разведение, вызывающее ЦПД в 50% лунок с культурой клеток. Величину титра рассчитываем по методу Рида и Менча и выражаем в тканевых цитопатических дозах (lg ТЦД50/см3).

 

   Инфекционный титр нецитопатогенных изолятов определяем, используя феномен нейтрализации интерференции в культуре клеток КСТ, в соответствии с рекомендациями (В.Н. Сюрин и соавт., 1977).

   Для этого культуральную жидкость, содержащую нецитопатогенный вирус, делим на две порции. Из первой делаем десятикратные разведения на питательной среде, содержащей эмбриональную сыворотку крови КРС, свободную от антител и вируса ВД-БС. Каждое разведение вносим в 4 лунки с монослойной культурой. Ту же процедуру проделываем со второй порцией, но используя моноспецифическую к вирусу сыворотку. На 3-й день удаляем питательную среду, монослой промываем раствором Хенкса и вносим 100 ТЦД50 цитопатогенного вируса ВД-БС, включая контроль в той же заражающей дозе вируса. Результаты учитываем по мере развития ЦПД в контрольных лунках, зараженных ЦП вирусом. В лунках с культурой, зараженной НЦП вирусом с эмбриональной сывороткой КРС, наблюдается отсутствие ЦПД, в то время как в остальных оно проявляется. Инфекционным титром вируса считаем его наивысшее разведение, где отсутствовало ЦПД в 50% лунок с культурой клеток. Величину титра рассчитываем по методу Рида и Менча и выражаем в тканевых цитопатических дозах (lg ТЦД50/см3).

   Данная методика позволила создать и поддерживать обширную коллекцию штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС, включающую как цитопатогенные, так и нецитопатогенные биотипы.

 

   Культуральные планшеты и матрасы, производства ТТР, имеют очень удачные характеристики, облегчающие работу по выделению и культивированию вирусов. Одной из наиболее важных их характеристик является контролируемый газообмен с низким испарением, абсолютно ровная поверхность роста и прозрачность стенок, не дающее  искажений при просмотре в микроскопе. К приятному дополнению можно отнести отличную маркировку и нестираемость надписей, нанесенных на специальную полосу.

   В дальнейшей работе мы планируем использовать пластик этой фирмы.

 

Это интересно!

Самка таракана способна за год отложить более двух миллионов яиц. Кроме того, таракан может девять дней жить без головы.

Корзина

Итоговая сумма:   0.00 Руб.
В корзину
www.noykem.ru
lab@ noykem.ru
(499) 346-39-14, (495) 77-46-319
(383) 363-85-90 (многоканальный)

 


Copyright (с) 2013 - 2018 ООО "Нойкем"